作业帮病毒核酸的提取需要注意哪些?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/03 10:15:45
病毒核酸的提取需要注意哪些?
病毒核酸的提取需要注意哪些?
病毒核酸的提取需要注意哪些?
.一定要注意冰上操作,低温离心.
2.戴口罩和勤换手套,去任何东西都要带着手套去取.
3.每次去器材的时候都要用镊子去夹,镊子要在酒精灯上烧一下.
4.所有的器材都要经过DEPC浸泡后高压后才可以使用,所需要的氯仿,酒精,异丙醇等都保证没有被RNA酶污染,不能用没有泡过DEPC的枪头去提取液体,一定要用DEPC浸泡过的枪头去吸,如果发现试剂有可能被污染了,要立即更换.
5.吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白,如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提,因为,吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用.一定要少吸,不要贪多,RNA提取不要求量,更多的要求质.
6.最后用75%的酒精洗一次就可以,尽量减少RNA提取时间.
7.最后一步,用DEPC水溶解RNA,不要用太多的体积,以保证RNA的浓度.
提取完后,电泳观察结果,如果上面的两条带都比较清楚的话,说明RNA提取的不错,可以一次多逆转录几管,不要把RNA冻存,以后在逆转录的效果不好.
1． SARS病毒样品是具有高度传染性的样品,样品的采集、保存、运输、处理、实验应遵循国家相应的管理规范和生物安全条例,进行样品处理时必须做好相关的保护措施,并在P3实验室条件下小心操作,防止样品飞溅,以确保实验人员安全.
2． 本试剂盒只适用于体外检测.
3． 实验请分区操作：第一区为配液区：用来准备扩增所需试剂；第二区为样品提取区：准备样品和对照品处理；第三区为扩增区：PCR扩增检测.各区物品均为专用,不得交叉使用,避免污染,实验后立即清洁工作台.
4． 本试剂盒中,样品提取液可室温避光保存,由于提取液低温易结晶,为方便使用可先将提取液稍微加热促溶,待结晶溶解后,再置于室温避光处储存.
5． 试剂盒各样品管使用前,充分融化后混匀,并稍微离心.反应液分装时和加模板时都应尽量避免产生气泡,上机前各反应管注意盖紧,以免荧光物质污染仪器.
6． 扩增后,应避免打开PCR反应管,以免造成污染,废弃物品务请灭菌消毒后丢弃.工作台及各物品定期用10%次氯酸钠、75%酒精或紫外灯处理.
7． 由于SARS为RNA病毒,提取过程中应特别注意防止RNA酶对其的降解作用,所用加样器、离心管、枪尖等均为专用,操作人员需穿洁净实验服,戴一次性手套和口罩,并且要勤换手套,减少RNA酶污染及交叉污染风险.
8． 本试剂所用的控制品为人工合成蛋白外壳包裹的假病毒,无感染性.