作业帮pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/12 05:50:03
pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?
pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?
pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?
大肠杆菌DH5α一般做克隆或保存质粒用,BL21用来做原核表达用.BL21(DE3) 菌株用于高效表达含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因,表达效率高.T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上.DH5α可以表达抗性基因,应该也能表达外源基因,但是我们一般不用该菌作为表达菌,可能与表达量、表达产物活性有关.毕竟体外表达活的的产物是为了继续做下面的工作,没有表达量,后面什么工作都无从谈起了
pET系列载体都用来自于λ 噬菌体的T7启动子，该启动子转录需要用到T7 RNA聚合酶。而野生的大肠杆菌（比方说DH5α或BL21）体内没有该酶的基因，所以无法启动该启动子后面基因的表达。BL21（DE3）菌株是在野生型BL21菌株的基础上，整合了一段来源于λ 噬菌体的DE3片段，该片段中包含了编码T7RNA聚合酶的基因，能够在IPTG或乳糖诱导下表达T7RNA聚合酶，而该聚合酶又能进一步转录T7...
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pET系列载体都用来自于λ 噬菌体的T7启动子，该启动子转录需要用到T7 RNA聚合酶。而野生的大肠杆菌（比方说DH5α或BL21）体内没有该酶的基因，所以无法启动该启动子后面基因的表达。BL21（DE3）菌株是在野生型BL21菌株的基础上，整合了一段来源于λ 噬菌体的DE3片段，该片段中包含了编码T7RNA聚合酶的基因，能够在IPTG或乳糖诱导下表达T7RNA聚合酶，而该聚合酶又能进一步转录T7启动子，从而启动载体上外源基因的表达。因此说，理论上只要整合了DE3片段的大肠杆菌（比如BL21（DE3）或JM109（DE3）等）都能用作pET系列载体的表达。
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