作业帮动物肝脏中DNA的提取步骤是?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/13 01:15:31
动物肝脏中DNA的提取步骤是?
动物肝脏中DNA的提取步骤是?
动物肝脏中DNA的提取步骤是?
操作
1． 称取猪肝8g,用匀浆器磨碎（冰浴）,加入相当于2倍肝重的0.1mol/L NaCl－0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液,研磨三次,然后倒出匀浆物,匀浆物在4000r/min 下离心10min；沉淀中再加入25ml缓冲液,于4000r/min 离心20min；取沉淀.
2． 在上述沉淀中加入40ml 0.1mol/L NaCl－0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液、20mlCHCl3－异戊醇混合液、4ml 5％ SDS使其终浓度为0.41％,振摇30min,然后缓慢加固体NaCl,使其浓度为1mol/L（约3.6g）.将上述混合液在3500r/min离心20min,取上清水相.
3． 在上述水相溶液中加入等体积冷95％乙醇,边加边用玻璃棒慢慢搅动,将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇,即得DNA粗品.用蒸馏水溶解并定容至50ml,用二苯胺法测定DNA含量.
4． 提纯将上述所得的DNA粗品置于20ml 0.015mol/L NaCl－0.0015mol/L 柠檬酸三钠溶液中,加入1倍体积的氯仿－异戊醇混合液,振摇10min,离心（4000r/min,10min）,倾出上层液（沉淀弃去）,加入1.5 倍体积95％乙醇,DNA即沉淀析出.离心,弃去上清液,沉淀（粗DNA）按本操作步骤重复一次.最后所得沉淀用无水乙醇洗涤2次,真空干燥.
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