3000bp的DNA如何分段设计引物我的基因全长是2821bp,我开始只是针对全长设计引物,我第一次神奇般的P出来了,可是以后再也没有P出来,我现在打算分段去P.可是我不知道该怎么样分?多少bp为一段,

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/13 05:11:10

3000bp的DNA如何分段设计引物我的基因全长是2821bp,我开始只是针对全长设计引物,我第一次神奇般的P出来了,可是以后再也没有P出来,我现在打算分段去P.可是我不知道该怎么样分?多少bp为一段,
3000bp的DNA如何分段设计引物
我的基因全长是2821bp,我开始只是针对全长设计引物,我第一次神奇般的P出来了,可是以后再也没有P出来,我现在打算分段去P.可是我不知道该怎么样分?多少bp为一段,请高人指教,在此,先谢过了啊

3000bp的DNA如何分段设计引物我的基因全长是2821bp,我开始只是针对全长设计引物,我第一次神奇般的P出来了,可是以后再也没有P出来,我现在打算分段去P.可是我不知道该怎么样分?多少bp为一段,
就我的感觉来说,2800bp不算长了.4k多的PCR我们这边很多实验室也做过,没什么问题.针对全长设计引物是合理的做法,因为分段的话后续步骤更多一些,比如酶切链接纯化什么的,那么引起突变或者降解的可能性就大些.
“第一次P出来了”是个什么概念?是仅仅有条带,还是已经测序正确呢?如果是前者,还是要确定一下它是不是杂带；如果是后者,那么就可以以它为模版继续扩增了.
以个人的经验来说,长片段PCR结果不好,首先考虑换条件（退火温度?离子强度?）,其次考虑换酶（有的酶强些,有的酶弱些）,再次考虑模版（如果是cDNA模版,它的质量很关键）,再次考虑引物（软件并不是每次都可信,如果有文献报道过的最好）.作为一个并不算长的片段,分段是下策.
真的要分段,在中间找个酶切位点分成两段就好了,每段一千多,也就可以了.再多了实在没意义,后面还麻烦.注意这个酶切位点必须是在这2800bp中只有一个,而且在酶切位点前后设计引物比较容易.
比如说,EcoRI吧,那么P出来的结果是 5'- XXX.GAATTCXXX,和XXXGAATTCXX.XXX -3',然后酶切链接测序去吧.

3000bp的DNA如何分段设计引物我的基因全长是2821bp,我开始只是针对全长设计引物,我第一次神奇般的P出来了,可是以后再也没有P出来,我现在打算分段去P.可是我不知道该怎么样分?多少bp为一段, PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在100-120BP长度,那该如何.模板比理论上要扩出来的目的片段长度还短,怎么解决如何进行引物的设计? 如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物 PCR设计的引物为什么是DNA而不是RNA 加HIS标签的引物如何设计如何设计带flag标签的引物如何设计已知序列的引物设计引物要先对模板DNA测序吗?不测序的话又如何知道能设计出碱基互补的引物呢?设计引物是否就是对引物长度的设计?（因为模板是已经存在的,引物只能根据模板序列设计） PCR模板为基因组DNA,一引物两侧有30bp反向互补序列,如何调整PCR程序?引物两侧指的是模板上是序列，不是引物本身。模板退火时会不会形成发夹结构？我用两步法试了一下，还是P不出来。我如何查引物bp 怎么PCR克隆4500bp的DNA长片段想通过PCR设计引物克隆葡萄基因组DNA的4500bp的长片段,可资料上都写着,PCR克隆一般是2000bp,4500bp是不是太长了,能PCR出来吗我有一个100bp左右的目的序列,怎么设计pcr引物.还有,对于对于一个比较大的基因来说,为什么有人会从这个基因的中间设计引物,这样可以p出这个基因吗? 为什么PCR产物总在2000bp以上我设计的产物是1000BP左右但是是简并引物为什么每次跑出来的产物是2000BP以上呢? 请教长片段DNA如何设计测序引物? 什么是基因组DNA污染?为什么设计引物时要跨外显子?看文献有这么一句话：“引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力,即引物应该跨外显子,最好是引物能跨外显子的接头 16S RDNA作为通用引物,用于细菌总DNA 提取后跑PCR,扩增出的片段是多少个bp呢?我的引物是 F: 5'-CAGCTCGTGTCGTGAGATGT-3' R: 5'-CGTAAGGGCCATGATGACTT-3 设计引物目的基因前延后延我设计引物,后期做表达.想要把目的基因前加500bp及后加500bp现在的问题是,我在查结核杆菌全长时发现两个连续的基因之间有一些bp的间隔现在的问题是,我是按基因