作业帮请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段.
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/07 07:41:15
请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段.
请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?
还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段.
请问,我用OVERLAP PCR 合成一小片段我要突变的79bp的基因,需要高保真酶吗?还有就是,我不是将两个基因连起来,而是引物本身也是模板合成我的基因片段.
一定要用高保真酶的,有两点原因：第一,就是第一条回答,高保真能够保障基因扩增引起的不必要突变.如果你的扩增片段全长只有79bp那就无所谓了,但要参照第二条）；第二,就是高保真酶不会在扩增的末尾（即3‘端）加A,引来后续操作不必要的麻烦.
一定要用高保真酶，只要做突变，目标就是只有设计位点被改变，而其他位点不能有变化。如果不用高保真酶，一旦发生错误掺入，后面的实验结果就没有意义了。而且即使用了高保真酶，扩增完成后，也任然需要克隆，测序后，才能确认片段是否满足要求。...
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一定要用高保真酶，只要做突变，目标就是只有设计位点被改变，而其他位点不能有变化。如果不用高保真酶，一旦发生错误掺入，后面的实验结果就没有意义了。而且即使用了高保真酶，扩增完成后，也任然需要克隆，测序后，才能确认片段是否满足要求。
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呵呵，一定要用高保真酶的，有两点原因：第一，就是第一条回答，高保真能够保障基因扩增引起的不必要突变。（呵呵，如果你的扩增片段全长只有79bp那就无所谓了，但要参照第二条）；第二，就是高保真酶不会在扩增的末尾（即3‘端）加A，引来后续操作不必要的麻烦。
~.~嗯嗯，谢谢你的答复，其实我想说，我的全长片段就是79bp（可能上面没有描述清楚）.其中我就做了一个单突变。也就是一个氨基酸...
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呵呵，一定要用高保真酶的，有两点原因：第一，就是第一条回答，高保真能够保障基因扩增引起的不必要突变。（呵呵，如果你的扩增片段全长只有79bp那就无所谓了，但要参照第二条）；第二，就是高保真酶不会在扩增的末尾（即3‘端）加A，引来后续操作不必要的麻烦。
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