菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/03 18:17:21
菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确?

菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确?
菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确?

菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确?
菌落PCR的假阳性高很可能是因为你做PCR的循环数过大,我们实验室一般对于高拷贝数的质粒,循环数不会超过25个,一般用25个.假阳性出现的原因关键在于做连接的时候加了比较多的目的基因的酶切产物,在转化时,那些没有连接入载体的PCR产物,有的会沾在感受态细胞上,还有的虽然在溶液中,涂板时一起就一起涂在板上了,挑菌的时候可能会挑到,即使没挑到,但菌表面的基因片段也有可能被扩增,如果你的循环数太高,就会在PCR时呈现阳性结果.希望能帮到你

菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确? [菌液PCR,测序,DNA提取,求助]菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确? PCR的时候用普通Taq酶能P出的东西,为什么换了高保真酶之后,同样的循环条件为什么P不出条带? [PCR,RT-PCR,质粒构建,求助]PCR的时候用普通Taq酶能P出的东西,为什么换了高保真酶之后,同样的循环条件为什么P不出条带? 检测血清的病毒为阴性,PCR确能扩增出目的条带,测序结果也对,是怎么回事? 为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢我用蓝白斑做的 T载体和目的片段连,为什么篮斑的 做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢? 转基因得到了转化苗,做PCR的时候,如果质粒P出了阳性 对照的基因组没有条带 是不是就能确定没转进去基因第一次做的时候,质粒是阳性的,样品有2个在目的片段那也出现了条带,但很暗,后来再 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 PCR目的条带的问题,cDNA模板没有问题,因为我的actin能跑出来.可是我的目的条带一直扩不出来,换了引物还是不管用.用别人肯定扩出来的引物去P,还是没有目的条带.这是为什么啊? PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带 PCR跑出的条带与目的条带不同怎么办 染色体步移法PCR某个基因为什么第一次第二次第三次所P出的条带大小呈现递减? 高保真酶PCR没有结果我用高保真酶做PCR的时候没有目的条带,但是同样的条件下用Taq酶条带就很亮,这是为什么呢? 在做PCR实验时为什么总是P不出条带? 为什么pcr的时候,DNA模板浓度高了,会有拖尾?拖尾是在目的条带上部,就是说碱基对多,如果我稀释DNA模板,效果就会好的很呐! PCR无法P出目的条带最近在做PCR,提取的基因组为模板,基因组序列上从NCBI上找的,没有错.但是无论如何换引物和PCR条件,都会得到一条比目的片段大500bp左右的亮条带.(引物换了很多对儿,卡的 电泳时总DNA没有条带,但是能P出来,PCR产物的电泳条带很亮很清楚,这能说明我得到的想要的目的片段了吗? 荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计,大家都说是为了避免提RNA时残留基因组的干扰,但是即使跨了内含子,假如有基因组残留,Real time PCR中还是能P出比cDNA大的一条带(含内含子的条带),探