农杆菌转化的具体步骤是什么?我想知道用农杆菌转化的具体步骤是什么,越详细越好.

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/02 07:53:46
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农杆菌转化的具体步骤是什么?
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转化前一天将需要做转化的野生型拟南芥苗子浇水浇透.
于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul:10ml接种.28℃,3000rpm摇过夜,约30小时,次日下午6点将已摇活的菌按(1:400)及750ul菌液转至汉300毫升YEP+K50+Rif中培养28℃,300rpm约14小时,次日上午8点测OD值,用YEP+Rif作为空白对照,当菌液达到OD600为1.3.0之内时,可收集菌体于250ml离心瓶(灭菌),4℃,4000g 离心10min .用10%蔗糖(含0.02%silwet)稀释至OD600 约为0.8-- 1.0左右即,用10%蔗糖作对照.转化时将花在溶液中浸泡50s左右,于弱光下生长.

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